Meios de Cultura

 Introdução

Os meios de cultura são preparações nas quais, ao longo de suas formulações, contêm nutrientes necessários para proporcionar o crescimento de micro-organismos, os mesmos podem ser sólidos, líquidos ou semi-sólidos, em sua composição, há a necessidade em haver nutrientes considerados essenciais, e em concentrações relevantes, para que não ocorra uma situação inibitória de crescimento. A esterilização deve ser realizada após a preparação de cada meio de cultura. O objetivo desta etapa é eliminar qualquer organismo vivo classificado como contaminante, após a finalização da preparação, o meio de cultura deve ser mantido em local livre de contaminação, para que no momento de sua utilização, o mesmo esteja em perfeitas condições.

Características Básicas dos Meios de Cultura

- Fonte de Carbono e Nitrogênio

 - Fonte de Energia

- Sais Minerais

 - Fatores de Crescimento

 - Condições Físicas

 - Esterilização

Classificação dos Meios de Cultura

De acordo com seu conteúdo químico, os meios de cultura podem ser sintéticos ou complexos.

1.    Meio de Enriquecimento

Geralmente líquido, de composição química rica em nutrientes, com a finalidade de permitir que as bactérias contidas em uma amostra clínica aumentem em número. Ex.: Caldo Brain Heart Infusion (BHI) e Caldo Tetrationato.

2.    Meio de Transporte

Consiste em um meio isento de nutrientes, contendo um agente redutor (Tioglicolato ou cisteína). Geralmente mantém o pH favorável, previne a desidratação de secreções durante o transp. e evita a oxidação e auto-destruição enzimática dos patógenos presentes. Ex.: Meio de Stuart, Meio de Cary-Blair e Caldo Tioglicolato.

3.    Meio Seletivo

A finalidade deste tipo de meio é selecionar as espécies que se deseja isolar e impedir o desenvolvimento de outros germes (adição de corantes, antibióticos) e outras substâncias com capacidade inibitória para alguns germes. Ex.: Agar Manitol Salgado e Agar SS

4.    Meio Diferencial

Possibilita a distinção entre vários gêneros e espécies de microrganismos, por possuir substâncias que permitem uma diferenciação presuntiva, evidenciada na mudança de coloração ou na morfologia das colônias. Ex.: Agar Eosin Methilene Blue (EMB), Agar McConkey e Agar Hektoen.

5.    Meio Indicador

É utilizado no estudo das propriedades bioquímicas das bactérias, auxiliando, assim, sua identificação. O mais simples é aquele usado no estudo das reações de fermentação. Ex.: Agar Triple Sugar Iron (TSI) e Agar Citrato de Simmons.

 

A escolha dos meios de cultura, para o processamento inicial das amostras é muito importante e está condicionada à flora patogênica desse local; - em geral é usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer condições de crescimento a todos os patógenos possíveis de estarem presentes. Para cada caso em particular, existem os meios utilizados rotineiramente na semeadura primária,atualmente, o procedimento mais utilizado é a aquisição de meios pré-fabricados e fornecidos de forma desidratada, onde é necessário apenas a pesagem criteriosa da quantidade necessária ao volume desejado, seguido de dissolução e esterilização.

Classificação quanto ao estado físico

- Líquidos ou caldos: crescimento indiscriminado com turvação do meio

 - Sólidos: crescimento de colônias isoladas, muito uitilizado para culturas puras

 - Semi-sólido: adição de menor quantidade de ágar, mobilidade bacteriana

Exemplos de meios específicos

• Agar Batata – Leveduras

• Agar Bismuto Sulfito – Salmonella spp (centro negro, borda clara e brilho metálico)

• Ágar Cled – Gran Positivo e Gram Negativo

 • EMB (Eosina Azul de Metileno) – Seletivo para Gram Negativo

• Agar Loeffler – isolamento de Corynebacterium diphtheriae

Meios de cultura mais comumente utilizados

Ágar nutriente

Rotineiramente, em sua maioria, os laboratórios utilizam meios que contêm peptona de carne de vaca ou peixe em caldo nutriente ou meio ágar sólido. Sendo a peptona produto da digestão enzimática de proteínas, fornecendo peptídeos que serão utilizados pelos microrganismos. Esses meios podem ser enriquecidos com extratos de leveduras (rico em vitaminas, coenzimas e nucleosídeos) ou hidrolisado de caseína, advindo da proteína do leite (rico em aminoácido).

Sua aplicabilidade resume-se na análise de água, alimentos e leite, servindo como um meio de cultura prévio de amostras submetidas a testes bacteriológicos, e também para o isolamento de culturas puras. Como as colônias são observadas nesse meio? Compostas por uma grande diversidade de microrganismos pouco exigentes, formando aglomerados em formato arredondado.

 

Ágar sangue

Utilizado na identificação dos microrganismos causadores de hemólise e/ou degradação dos eritrócitos, proporcionando o crescimento de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, bem como os fungos. Contendo em seu soro, sangue total e sangue total aquecido, diversos nutrientes para os patógenos, sendo assim, útil para o enriquecimento dos meios de cultura. • Contêm dois componentes primários: um meio básico (p.ex., soja tríptica, infusão de cérebro e coração, base Brucella) e o sangue (p.ex., de ovelha, cavalo ou coelho).

Como as colônias se apresentam nesse meio?  Podem ser compostas por bactérias hemolíticas, por exemplo, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Enterococcus spp., Moraxella catarrhalis, Listeria monocytogenes, ou por bactérias não-hemolíticas. Note na parte central da imagem abaixo que ao redor das colônias há uma área clara correspondente ao local onde houve hemólise. Como as colônias se apresentam nesse meio? Podem ser compostas por bactérias hemolíticas, por exemplo, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Enterococcus spp., Moraxella catarrhalis, Listeria monocytogenes, ou por bactérias não-hemolíticas. Note na parte central da imagem abaixo que ao redor das colônias há uma área clara correspondente ao local onde houve hemólise.

Ágar chocolate

Também contêm hemácias, entretanto, é considerado mais enriquecido do que o ágar sangue, pois a hemoglobina está mais acessível. Consistindo em um ágar sangue modificado, pois a hemácia quando adicionada ao meio aquecido é rompida, liberando a hemoglobina e o meio tornase de tom marrom. Como as colônias se apresentam nesse meio?  Esse meio é mais utilizado para o cultivo de bactérias patogênicas fastidiosas (exigentes) que não crescem em ágar sangue, por exemplo, Neisseria gonorrhoeae e Haemophilus influenzae. • Tipos de ágar chocolate: ágar Thayer-Martin e ágar Martin-Lewis.

Ágar Manitol

É um meio seletivo para estafilococos e diferencial para Staphylococcus aureus. Sendo assim, o meio contém caseína digerida e tecido animal, extrato de carne, manitol, sais e vermelho fenol. Ressaltando-se que os estafilococos são capazes de desenvolver-se em meios mais concentrados com sal, e os Staphylococcus aureus podem fermentar o manitol.

Como as colônias se apresentam nesse meio?

Bactérias aptas a se desenvolverem em concentrações de cloreto de sódio em 7,5% crescerão nesse meio, ou seja, o sal pode impedir o crescimento da maioria das bactérias, exceto das espécies de Staphylococcus spp. As bactérias S. aureus capazes de fermentar o manitol, apresentam colônias amareladas e as bactérias de outras espécies de Staphylococcus são incapazes de fermentar o manitol e apresentam colônias incolores.

Ágar MacConkey

Meio seletivo e diferencial, contém cristal violeta e sais biliares, assim como açúcar lactose e um indicador de pH, esse último torna as colônias fermentadoras da lactose na cor vermelha e as colônias não fermentadoras da lactose incolores ou translúcidas. Além disso, ele inibe o crescimento das bactérias Gram-positivas e permite o crescimento das Gram-negativas.

Como as colônias são observadas nesse meio?

Normalmente caracterizadas pelas enterobactérias, encontradas no intestino humano que, por sua maioria, fermentam a lactose e apresentam colônias maiores de 1 mm de diâmetro após incubação de 18 a 24 horas, possuindo aspecto opaco, brilhante, transparente ou mucoide.

 • Bactérias produtoras de ácidos fortes, como a Escherichia coli, formam colônias em vermelho-escuro;

• Bactérias produtoras de ácidos fracos, formam colônias em rosa-pálido ou claras na periferia e com o centro mais rosado.

Ágar Mueller-Hinton

Meio empregado em testes de rotina de suscetibilidade bacteriana aos antibióticos (antibiograma). Composto por extratos de caseína e carne, sais, cátions divalentes e amido solúvel essencial para a reprodutibilidade dos resultados.

Como as colônias são observadas nesse meio?

Pode ser realizado pela técnica de Kirby/Bauer (difusão), este resume-se na dispersão, no meio de Ágar Mueller-Hinton, de substâncias antimicrobianas que são embebidas em discos de papel-filtro e dispensadas sobre a placa. Assim, as colônias bacterianas podem ser classificadas como:

• Resistente: o microrganismo apresenta resistência ao antimicrobiano, sendo nesse caso comprometida a eficácia do fármaco.

• Intermediária: o microrganismo apresenta resistência intermediária ao antibiótico, a eficácia do fármaco coloca-se sob suspeita.

• Sensível dose-dependente: o microrganismo apresenta sensibilidade ao antimicrobiano, nesse caso apenas quando ocorre exposição a altas dosagens da droga.

• Sensível: o microrganismo é suscetível ao antibiótico colocado no disco, tornando-se assim recomendado o uso deste fármaco para o combate da patologia analisada. Esse resultado é notado caso não haja o crescimento do microrganismo próximo ao antibiótico, sendo a medida do halo de inibição acima do prescrito para a droga aplicada.

O que são meios de cultura?

Quais são os tipos de meios de cultura?

Quais são alguns exemplos de meios de cultura comuns?

Como os meios de cultura seletivos e diferenciais são usados para isolar microrganismos específicos?

Como os meios de cultura são usados na identificação de patógenos clínicos?

Referências

Meios de Cultura PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL MICROBIOLOGIA APLICADA MICROBIOLOGIA APLICADA. [s.l: s.n.]. Disponível em: <https://professor.pucgoias.edu.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/5583/material/Meios%20de%20Cultura%20aula%20pr%C3%A1tica.pdf>.

BARBOSA, Flávio Henrique Ferreira; BARBOSA, Larissa Paula Jardim de Lima. Alternativas metodológicas em Microbiologia: Viabilizando atividades práticas. Bio Terra: Revista de biologia e ciências da terra, Campina Grande, v. 10, n. 2, p.134- 143, 01 jun. 2010. Semestral. Disponível em: . Acesso em: 04 jan. 2015.

 

Meios de Cultura PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL MICROBIOLOGIA APLICADA MICROBIOLOGIA APLICADA. [s.l: s.n.]. Disponível em: <https://professor.pucgoias.edu.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/5583/material/Meios%20de%20Cultura%20aula%20pr%C3%A1tica.pdf>.

 

SILVA, Edilsa Rosa da; SOUZA, Aparecida Sônia de. Introdução à Microbiologia: O Mundo dos Microrganismos. In: SILVA, Edilsa Rosa da. Introdução ao estudo da microbiologia:: teoria e prática. Brasília: Ifb, 2013. Cap. 1. p. 10-14.

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